多酚、芥子碱、植酸的测定

1. 总酚标曲的制定

取25mg单宁（烘干后重）溶于100ml甲醇溶液中，分别去0μl、20μl、40μl、60μl、80μl、100μl放于玻璃试管中，加入1ml蒸馏水，再加入0.5ml-福林酚试剂（1：2），加入5ml 10% na2co3，混匀静置20min,720测OD值。

2. 总酚样品的测定

准确称取0.3g(精确至0.0001g)样品于离心管中，加入3.5ml甲醇，混合器30min,30℃离心30分钟（4500转/min），离心后，取混合上清液100μl于试管中，加蒸馏水1ml, 0.5ml-福林酚试剂（1：2），加入5ml 10% na2co3,摇20min, 720测OD值,蒸馏水做对照。（芥子碱样品于330nm处测定吸光度值） 3. 计算

X1%=0.875×V×10/m

V–吸光度值标准曲线所查对应体积μl M-样品质量

植酸的测定（定磷法）

1. 标准曲线的绘制

磷酸二氢钾在105℃干燥1h,于干燥器中冷却后称取0.2195克3溶解于水，定量地转至1000ml容量瓶中，加硝酸3ml,用水稀释至刻度，摇匀，即为50μg/ml的磷标准溶液。 准确移取磷标准液0.0ml、1.0ml、2。0ml、4.0ml、8.0ml、16.0ml于50ml容量瓶中，各加入钒钼酸铵显色剂10ml,用水稀释至刻度，摇匀，常温下放置10min以上，以0.0ml溶液为参比，用1cm比色皿，在400nm波长下用分光光度计测各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制工作曲线。 2. 操作步骤

（1） 干灰化法：称取0.5g（m3）制备好的试样于灰化坩埚中，精确至0.2mg,在电炉上炭

化，直至样品无烟。再放入高温炉，550℃灰化3h,取出冷却，加入10ml(1:1)盐酸溶液和硝酸数滴，小心煮沸约10min,冷却后转入100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，

摇匀，为试样分解液。

（2） 游离磷：称取0.5g(m4)制备好的试样于三角瓶中，加入100ml蒸馏水，放入摇床摇

3h左右。（游离磷试样分解液） 3. 试样的测定：

准确移取试样分解液1.0-10.0ml(含磷量50-750μg)于50ml容量瓶中，加入钒钼酸铵显色剂10ml,用水稀释到刻度，摇匀，常温下放置10min以上，用1cm比色皿在400nm波长下用分光光度计测定试样分解液的吸光度，在工作曲线上查得试样分解液的含磷量。 4. 结果计算

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X1=M1×V/(M3×V1×104)

X1为试样中总磷含量 m1为工作曲线查得试样分解液的磷含量，μg；V为试样总体积，ml;m 为试样质量，g;v1为试样测定时移取试样的分解液体积，ml.

X2=M2×V/(M4×V2×10 4)

X2为试样中游离磷含量 m2为工作曲线查得试样分解液的磷含量，μg；V为试样总体积，ml;m 为试样质量，g;v2为试样测定时移取试样的分解液体积，ml. 植酸含量%=(x1-x2）×3.548